A'AI. Chudinova, V.A. Platonov, A.V. Alexandrova, S.N. Elansky
Talu ai nei, na faʻaalia ai o le ascomycete fungus Ilyonectria crassa e mafai ona osofaʻia fatu pateta. O lenei galuega o le uluai suʻesuʻeina lea o uiga faʻaola ma le tetee atu i nisi fungicides o le I. crassa strain e vavae ese mai pateta. O faʻasologa o vaega faʻapitoa o ituaiga o le "pateta" e fetaui lelei ma mea na maua muamua mo sigi e vavae ese mai aʻa o le narcissus, ginseng, aspen ma le beech, lily bulbs ma lau tulip. E foliga mai, o le tele o vao ma togalaau e mafai ona faʻaagaga mo I. crassa. O le su'esu'ega na a'afia ai fasi tamato ma pateta, ae le'i a'afia ai se fua tamato atoa po'o se fala pateta e le'i a'afia. E fa'aalia ai o I. crassa o se manu'a manu'a. Iloiloga o le teteʻe i fludioxonil, difenoconazole ma azoxystrobin i luga o se meaʻai paleni na faʻaalia ai le maualuga o le aoga o nei vailaʻau.
O le faʻamaoniga o le EC50 (faʻaogaina o le fungicide e faʻagesegese i lalo i le 2 taimi le fua o le tuputupu aʻe o le radial o le kolone e faʻatatau i le faʻaogaina o le fungicide) e tutusa ma le 0.4; 7.4 ma le 4 mg/l, fa'asologa. Ole avanoa e atiaʻe ai se faʻamaʻi e mafua mai ile I. crassa e tatau ona amanaʻia pe a suʻesuʻeina phytopathologically fatu pateta ma atinaʻe puipuiga o laau.
O le atinaʻeina o microorganisms phytopathogenic e oʻo atu ai i le maualuga o le gau i laʻasaga uma o le totoina ma le teuina o pateta. Pe a fuafuaina ni puipuiga puipuia, e pei o se tulafono, e taua tele faʻamaʻi pipisi, e pei o ituaiga o genera Alternaria, Fusarium, Phoma, Helminthosporium, Colletotrichum, Phytophthora, ma isi. e uiga i foliga vaaia o meaola ninii phytopathogenic fou i luga o pateta. O latou biology e le lelei suʻesuʻeina, o le aoga o fungicides faʻaaogaina i luga o pateta e faasaga ia i latou e le o iloa, ma e leʻi faia ni metotia faʻamaonia. A atia'e fa'atele, e mafai ona fa'aleagaina tele le totō pateta. O se tasi o nei meaola ninii o le ascomycete fungus Ilyonectria crassa (Wollenw.) A. Cabral & Crous, na maua muamua e le au tusitala i luga o fatu pateta (Chudinova et al., 2019).
O lenei pepa o lo'o tu'uina atu ai fa'ai'uga o se au'ili'iliga o le galu I. crassa fa'aesea mai le fatu pateta. O le morphology o colonies ma mycelial structures o I. crassa, nucleotide sequences o ituaiga-specific DNA vaega, virulence i pateta ma tamato, ma le tetee atu i nisi fungicides lauiloa na suesueina.
Mea ma metotia
O le mamafa o loʻo faʻaaogaina i lenei galuega o le I. crassa 18KSuPT2, faʻaesea i le 2018 mai se faʻamaʻi pateta pateta ua tupu i le Kostroma itulagi. O le fatu na afaina i le pala mago ma se ana e ufiufi i le mycelium lanu enaena. I le faʻaaogaina o se nila faʻamaʻi faʻamaʻi, na faʻafeiloaʻi ai le mycelium fungal i totonu o se ipu Petri faʻatasi ai ma se medium agar (beer wort 10%, agar 1.5%, penicillin 1000 units / ml). O ipu na faʻagogo i le pogisa ile 24°C.
Mo ata pue, iloiloga o le tele ma le morphology o spores ma totoga sporulation, o le Leica DM2500 malamalama microscope ma le ICC50 HD mea pueata ma le Leica M80 binocular microscope ma le IC80HD mea pueata numera (Leica Microsystems, Siamani).
Ina ia vavae ese le DNA, o le mycelium fungal na tupu i totonu o le pi vai, ona faʻaisa ai lea i le nitrogen vai, homogenized, incubated i le CTAB buffer, faʻamamaina i le chloroform, ma fufulu faalua i le 2% ava malosi.
O le auala e aveese ai le DNA o loʻo faʻamatalaina auiliili i le tusiga a Kutuzova et al. (2017).
Ina ia iloa ai ituaiga ituaiga e ala i metotia mole ma faʻatusatusaga ma isi faʻamaʻi lauiloa o I. crassa, na faia le PCR ma faʻauluuluga e faʻatagaina ai le faʻalauteleina o vaega DNA faʻapitoa: ITS1-5,8S-ITS2 (primers ITS5 / ITS4, White et al., 1990), itulagi o b genes -tubulin (Bt2a / Bt2b, Glass ma Donaldson, 1995) ma fa'aliliuga fa'aumiumi vaega 1α (tef1α) (primers EF1-728F/EF1-986R, Carbone ma Kohn, 1999). Amplicons o le umi manaʻomia na maua mai le gel e faʻaaoga ai le CleanUp kit mai Evrogen. O vaega faʻalauteleina na faʻasolosolo faʻasolosolo e faʻaaoga ai le BigDye®Terminator v3.1 Cycle Sequencing Kit (Applied Biosystems, CA, ISA) i luga o le Applied Biosystems 3730 xl automated sequencer (Applied Biosystems, CA, USA). O fa'asologa o nucleotide na maua na fa'aaogaina e su'e ai se fa'atusa i le GenBank database a le US National Center for Biotechnology Information (NCBI). Na faia suʻesuʻega phylogenetic e faʻaaoga ai le polokalame MEGA 6 (Tamura et al., 2013).
O le faʻamautuina o le faʻaleagaina na faia i luga o fua lanu meamata atoa o tamato fua tele (eseesega Dubrava) ma fatu pateta (eseese Gala). E le gata i lea, ina ia faʻataʻitaʻiina le faʻaleagaina o fualaʻau ma fualaʻau ua faʻaleagaina, sa faʻaaogaina fasi fasi fua tutusa ma fualaʻau. O fasi pugala'au sa tu'u i totonu o potu susū, o ipu Petri ma pepa faamama susu ile pito i lalo. Na tuʻuina se faʻataʻitaʻi tioata i luga o le pepa, lea, i le isi itu, na tuʻuina ai fasi fatu poʻo fualaau aina. O fatu atoa ma fuala'au 'aina sa tu'u i totonu o atigipusa o lo'o iai pepa faamama susu ile pito i lalo. O se fasi agar (5×5 mm) faatasi ai ma fungal hyphae sa tuu i le ogatotonu o le fasi fasi pepa (po o luga o le tino o le tuber po o fualaau aina) ma fungal hyphae pe a uma le 5 aso o le totoina i luga o le wort agar.
Sa su'esu'eina le tete'e atu o a'a i fungicides i tulaga su'esu'e i luga o se ala fa'aalafaga agar. Na matou suʻesuʻeina le faʻaogaina o vailaʻau faʻamaʻi Maxim, KS (fludioxonil malosi, 25 g / l), Quadris, KS (azoxystrobin 250 g / l), Skor, CE (difenoconazole 250 g / l) (Faʻamaumauga a le Setete ..., 2020 ). O le iloiloga na faia i ipu Petri i luga o le wort-agar medium faʻatasi ai ma le faʻaopoopoga o vailaʻau suʻesuʻe i le faʻaogaina o le mea malosi o le 0.1; 1; 10 ppm (mg/l) (mo fludioxonil ma difenoconazole), 1; 10; 100 ppm (mo azoxystrobin) ma luga o se ala e aunoa ma fungicide (pulea). O le fungicide na faʻaopopo i le faʻafefeteina ma faʻamafanafana i le 60 °C medium, ona maeʻa lea ona sasaa le ala ile Petri ipu. O se poloka agar ma le mycelium fungal na tuʻuina i le ogatotonu o se ipu Petri ma faʻaleleia i le vevela o le 24 °C i le pogisa. A maeʻa le 7 aso o faʻamaʻi, na fuaina le lautele o kolone i itu e lua faʻatasi; o fua fa'atatau mo kolone ta'itasi sa ave fa'atatau. Sa faia fa'ata'ita'iga i fa'atolu. Faʻavae i luga o faʻaiʻuga o suʻega, o le EC50 index na faʻatatauina, tutusa ma le fungicide concentration na faʻaititia ai le afa o le fua o le radial tuputupu aʻe o le kolone e faʻatatau i le le faʻaogaina o le fungicide.
Iʻuga ma talanoaga
I luga o ipu Petri ma wort agar, o le gaʻo na fausia ni kolone ma le mycelium paʻepaʻe paʻepaʻe. O le ala i lalo o le mycelium ua liu mumu-enaena. Ina ua mago le alalaupapa, o le gaʻo na fausia ni ituaiga o spores se lua i luga o conidiophores tasi ma faʻapipiʻi i totonu o sporodochium laiti. Macroconidia e faʻalautele, cylindrical, ma le tasi i le tolu septa, averesi umi 27.2 µm ma le tele o tau mai le 23.2 i le 32.2 µm, lautele - e oo atu i le 4.9 µm (Fig. 1). Ole averesi ole umi ole microconidia e 14.3 µm ma le tele o tau mai le 10.3 i le 18.1 µm, lautele - e o'o ile 4.0 µm. O mataitusi uma macro- ma micromorphological e pau i totonu o le tele o fesuiaiga o le ituaiga Ilyonectria crassa (Cabral et al., 2012).
O faʻasologa o vaega DNA faʻapitoa ituaiga (ITS, b-tubulin, TEF 1α) e fetaui lelei ma faʻasologa o le I. crassa strains na matou suʻesuʻeina muamua (Chudinova et al., 2019, Table 1). Ina ia mafai ona suʻesuʻeina le faʻateleina o le I. crassa i isi itulagi ma auʻiliʻili le fusi o fualaʻau ua afaina, o faʻasologa DNA tutusa na suʻesuʻeina i le GenBank database (Table 1). O le fa'asagaga na va'aia mai le 86 i le 100%. O faʻasologa o vaega uma e tolu o le DNA o le "patato" strain o I. crassa e tutusa lelei ma le faʻasologa o faʻamaʻi vavae ese mai lili ma aʻa narcissus i Netherlands ma mai ginseng root i Kanata. E le'i mafai ona matou maua se isi I. crassa strains fa'atasi ai ma fa'asologa tutusa e tolu na su'esu'eina i fa'amaumauga tatala. Ae ui i lea, o le auiliiliga o le teuina o ITS ma le b-tubulin sequences na faʻaalia ai le i ai o le I. crassa i luga o laulaau tulip i Peretania. O sigi e tutusa ITS fa'asologa na iloa pe a su'esu'eina le mycobiota o a'a aspen i Kanata ma beech i Italia, ma fatu pateta i Saudi Arabia (Laulau 1). O fa'ai'uga o lenei su'esu'ega o lo'o ta'u mai ai o le I. crassa o lo'o i ai le tufatufaina atu i le lalolagi atoa ma e mafai ona osofa'ia ituaiga eseese o la'au.
Pe a fuafuaina le pathogenicity i tamato ma fasi pateta i le aso 5, o le lautele o le liona na oʻo i le 1.5 cm I le taimi lava e tasi, o le suʻesuʻega suʻesuʻe e leʻi aʻafia ai se fua tamato atoa poʻo se pateta pateta paʻu. Ae ui i lea, o le faaleagaina o sepals na matauina i tamato. Ina ia le aofia ai le ono afaina, na vavae ese ai se faʻamaʻi i totonu o se aganuu mama mai le mycelium lea na atiaʻe i luga o se fasi pateta pateta. Sa tutusa lelei lava ma le tiga matua. I. crassa e foliga mai o se manu'a parata.
O le togafitiga muamua o fatu fatu ma fungicides e mafai ona faʻaitiitia ai le atinaʻeina o faʻamaʻi i luga o laʻau i le vaitau o le tuputupu aʻe. Ina ia filifilia fungicides aoga, e taua le iloilo po o fea e aoga e faasaga i I. crassa. O le suʻesuʻega na suʻesuʻeina lautele faʻaaogaina mea aoga o fungicides - fludioxonil, azoxystrobin, difenoconazole. O le Fludioxonil o se vaega o le tele o sauniuniga fefiloi e fa'aaogaina e togafitia ai fatu ma fatu fatu a'o le'i totoina. Ole Fludioxonil (Maxim) e fa'aaogaina foi e togafitia ai fatu fatu ae le'i teuina. O le Difenoconazole ma le azoxystrobin o loʻo aofia ai foʻi i le tele o sauniuniga e faʻaaogaina mo le gaosia o fatu fatu, faʻapea foʻi ma sauniuniga e faʻatatau mo le gaosia o laau toto (State catalog..., 2020).
O le fua o le tuputupu aʻe o I. crassa na suʻesuʻeina i luga o faʻasalalauga (Fig. 2) faʻatasi ai ma faʻasalalauga eseese o mea aoga: fludioxonil (EC50 = 0.4 ppm), azoxystrobin (EC50 = 4 ppm) ma le difenoconazole (EC50 = 7.4 ppm) (Laulau 2) . O nei vailaʻau e mafai ona manatu e sili ona aoga e faasaga i I. crassa, talu ai o latou EC50 e matua maualalo ifo nai lo le faʻatonuga o le vailaʻau i totonu o le sua galue o loʻo faʻaaogaina e togafitia ai tubers. E tusa ai ma le Setete Catalog... (2020), o le maualuga o le fludioxonil i le vai mo le togafitia o fatu pateta e mai le 500 i le 1000 ppm, azoxystrobin (i totonu o le vai mo le togafitia o le pito i lalo o le furrow) - 3750-9375 ppm, difenoconazole (i le vai mo le togafitia o laau toto) - 187.5–625 ppm.
Fuafuaga 1. Fa'asologa tutusa i le va o ituaiga fa'asologa fa'apitoa o galu 18KSuPT2 ma Ilyonectria crassa o lo'o maua i le Genbank database
Manogi | La'au fa'ato'aga, nofoaga e alu ai | Numera fa'asologa na teuina i totonu o le GenBank, pasene o mea tutusa | fesoʻotaʻiga | ||
LENEI | β-tubulin | TEF 1α | |||
17KSPT1ma le 18KSuPT2 | Pula pateta, itulagi Kostroma. | MH818326 | MH822872 | MK281307 | Chudinova et al., 2019, lenei galuega |
CBS 158/31 | A'a o Narcissus, Netherlands | JF735276 100 | JF735394 100 | JF735724 99.3 | Cabral et al., 2012 |
CBS 139/30 | Lily bulb, Netherlands | JF735275 100 | JF735393 99.7 | JF735723 99.3 |
|
NSAC-SH-1 | Ginseng root, Kanata | A295311 99.4 | JF735395 100 | JF735/725 99.6 |
|
RHS235138 | Laulaau tulip, UK | KJ475469 100 | KJ513266 100 | ND | Denton, Denton, 2014 |
MT294410 | A'a Aspen, Kanata | MT294410 100 | ND | ND | Ramsfield et al., 2020 |
ER1937 | Buc, Italia | KR019363 99.65 | ND | ND | Tizzani, Haegi, Motta. Tu'u sa'o |
KAUF19 | Umaga pateta, Saudi Arabia | HE649390 98.3 | ND | ND | Gashgari, Gherbawy, 2013 |
ND = le teuina
Laulau 2. Tete'e ole Ilyonectria crassa ile fungicides
(mea malosi) | EC50, ppm | ||||
3 aso | 5 aso | 7 aso | |||
Pule | 17 ± 2 | 33 ± 5 | 47 ± 3 | ||
Quadris, KS (fzoxystrobin) | 18 ± 1 | 34 ± 2 | 48 ± 2 | ||
11 ± 1 | 11 ± 1 | 12 ± 1 | |||
11 ± 1 | 11 ± 1 | 12 ± 1 | |||
Maxim, KS (fludioxonil) | 16 ± 1 | 28 ± 2 | 48 ± 2 | ||
7 ± 1 | 13 ± 3 | 19 ± 4 | |||
5 ± 1 | 12 ± 1 | 17 ± 5 | |||
Sikoa, EC (difenoconazole) | 18 ± 1 | 35 ± 2 | 48 ± 1 | ||
11 ± 1 | 24 ± 3 | 35 ± 4 | |||
11 ± 1 | 13 ± 1 | 17 ± 3 |
I la matou galuega, I. crassa strains na vavae ese mai fatu pateta i le Kostroma ma Moscow itulagi (Chudinova et al., 2019). O se vaega maualuga o aʻafiaga faʻamaʻi ma ITS faʻasologa e tutusa ma I. crassa na iloa pe a suʻesuʻeina le mycobiota o fatu pateta i Saudi Arabia (Gashgari ma Gherbawy, 2013). E foliga mai, o le I. crassa e le seasea i pateta e pei ona foliga mai ai. O a matou suʻesuʻega na faʻaalia ai e mafai e le gaʻo ona aʻafia fua tamato leaga. E iloa mai tusitusiga e mafai e I. crassa ona atiaʻe saprotrophically i le palapala (Moll et al., 2016), ma faʻamaʻi ai foi le tele o ituaiga o laau, e oʻo lava ia i latou e mamao i le taxonomic faaupuga e pei o daffodils, lilies, ginseng, aspen, ma beech (Laulau 1). E foliga mai, o le tele o vao ma togalaau e mafai ona faʻaagaga mo I. crassa. O loʻo i luga o loʻo faʻaalia ai pe a atiaʻe ni puipuiga puipui, e tatau ona amanaʻia le ono afaina ai o fatu pateta e lenei gaʻo. O sauniuniga fa'aaoga lautele mo le togafitia o fuala'au pateta, o lo'o i ai le fludioxonil, azoxystrobin ma le difenoconazole, ua fa'aalia ai le maualuga o le fugicidal aoga i le I. crassa.
O le galuega na lagolagoina e le Russian Foundation for Basic Research (fa'ameanoa Nu. 20-016-00139).
O le tala na lomia i le tusi talaaga "Bulletin of Plant Protection", 2020, 103(3)